УДК 577.15
ББК 28.072
Крайнюкова Е.Ю., Цикуниб А.Д.
ФГБОУ ВО «Адыгейский государственный университет»
Лаборатория нутрициологии и экологии НИИ комплексных проблем АГУ
ФЕРМЕНТАТИВНЫЙ ПОТЕНЦИАЛ СЕМЯН СОИ: СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ
Аннотация. В статье представлен анализ современных представлений ферментативного потенциала семян сои, описана биологическая роль и биотехнологическое применение ферментов сои в различных областях промышленности.
Ключевые слова: соя, ферменты сои, биологическая роль ферментов, биотехнология ферментов, липоксигеназа, липаза, β-амилаза, сукцинатдегидрогеназа, пероксидаза, уреаза.
Kraynyukova E.Yu., Tsikunib A.D.
Adyghe State University
Nutrition and Environment Laboratory, of Scientific Research Institute of complex Problems of ASU
THE ENZYMATIVE POTENTIAL OF SOY BEAN SEEDS: CURRENT CONCEPTS
Abstract. The article presents an analysis of modern concepts of the enzymatic potential of soybean seeds, describes the biological role and biotechnological application of soybean enzymes in various fields of industry.
Keywords: soy, soy enzymes, biological role of enzymes, enzyme biotechnology, lipoxygenase, lipase, β-amylase, succinate dehydrogenase, peroxidase, urease.
Изучение ферментов одно из актуальных направлений биохимии, биотехнологии и аналитической химии. Биохимические процессы, лежащие в основе развития метаболических реакций клеток, катализируемых ферментами, позволяют организму адаптироваться к меняющимся условиям окружающей среды [1]. Эти реакции отражаются в изменениях различных биохимических показателей, позволяющих определить адаптационную стратегию толерантности и выживания организма, как при природных, так и при антропогенных воздействиях [5]. Общие закономерности биохимической адаптации животных с участием ферментов изучены досконально [2,3,4], однако недостаточно для растений, особенно культурных, в том числе сои.
Ферменты в качестве адаптационных маркеров невероятно эффективны и всегда предпочтительнее обычных химических реакций. Среди плюсов можно выделить специфичность по отношению к катализируемой реакции и субстрату, минимальные затраты энергии, меньшее количество побочных продуктов с экологической и физиологической токсичностью. Все эти факторы делают ферменты перспективными кандидатами при выборе биохимического маркера для определения качества и безопасности растений. Однако эффективность аналитического сигнала будет достигнута только тогда, когда выбранный фермент будет в полной мере отражать изменения биологических процессов, происходящих в растении при хранении и прорастании [5].
Энзимология существует чуть более ста лет, в течение которых был, достигнут значительный прогресс, как в идентификации новых ферментов, так и в разработке новых методик для ферментативной кинетики. Ферменты находят также широкое применение в аналитической химии для контроля качества и безопасности в объектах пищевой, микробиологической и фармацевтической промышленности, мониторинге окружающей среды. Широкому внедрению ферментативных методов в практику клинических, экологических, производственных, научно-исследовательских лабораторий способствуют не только их высокая активность и избирательность действия, позволяющие значительно повысить чувствительность и селективность методов анализа, но и простота аппаратурного оформления и методики эксперимента, экспрессность [40].
Ферментативными методами можно определять сами ферменты, их субстраты (то есть соединения, превращение которых катализируют ферменты), а также соединения, воздействующие на каталитическую активность ферментов - их эффекторы, активаторы или ингибиторы (то есть вещества, которые либо повышают, либо понижают активность фермента).
Расширение и обобщение существующих фактов о ферментном составе сои может быть одним из инструментов изучения, определения качества и безопасности адаптации растений к условиям выращивания.
Целью работы явилось изучение современных представлений о ферментативном потенциале сои, строении ферментов, их биологической роли, кинетики, а так же выбора фермента в качестве биохимического маркера качества и безопасности семян сои.
Соевые бобы, как и все семена, содержит комплекс ферментов, необходимых для прорастания. Наиболее изученными являются липоксигеназа, липаза, бета-амилаза, пероксидаза, сукцинатдегирогеназа, уреаза [6,7,31].
Технологически наиболее важным ферментом в соевых бобах является липоксигеназа (КФ 1.13.11.12) – фермент класса оксидоредуктаз. Этот класс ферментов также включает каталазу, пероксидазу и полифенолоксидазу. Липоксигеназа – железосодержащий фермент, катализирующий реакцию диоксигенации полиненасыщенных жирных кислот в гидропероксиды [7,34]. Фермент состоит из двух доменов: N-конца и большего C-конца, где расположен его активный центр. Выделение белкового домена приводит к потере каталитической активности. В активном центре железо закреплено координационными связями у атома Nε гистидина и кислорода с С-концевой карбоксильной группой. Фермент, по-видимому, генерирует свободные радикалы, но механизм их образования неясен [7].
Из обезжиренной соевой муки выделены две липоксигеназы: липоксигеназа 1 (LOX 1) которая есть как в исходном, так и в прорастающем зерне, катализирует окисление свободной линолевой кислоты и производит 9-гидропероксиды (9-HPOD), и липоксигеназа 2 (LOX 2), которая образуется в зерне только после прорастания, катализирует окисление линолевой кислоты в составе трилинолеина способствует образованию 13- гидропероксидов (13-HPOD) (рис.1).
Рисунок 1. Образование 9- и 13-гидропероксидов (9-HPOD, 13-HPOD)
под действием LOX-1 и LOX-2 [26].
Активность той или иной формы липоксигеназы зависит от температуры и рН. Оптимальным условием для действия LOX-1 является температура от 35 до 40о С. При этой же температуре наблюдается максимальная активность липазы. Активность LOX-2, которая образует 13-гидропероксид, начинает существенно снижаться только по достижении температуры 55о С. Эти две формы липоксигеназы также отличаются по значению величины рН, при которой наблюдается их максимальная активность: для LOX-1 это значение составляет 5,8; для LOX-2 6,2 рН [13].
Исследования физиологической роли LOX в регуляции роста и развития растений проводились на разных уровнях для широкого круга растений. Установлена роль основных продуктов LOX в регуляции функций устьиц [12] или в повышении устойчивости растений к бактериям [13]. Таким образом, результаты анализа литературы указывают на участие LOX в регуляции метаболизма растительных клеток и указывают на то, что LOX является мишенью для взаимодействия регулирующего воздействия, как ответов роста, так и факторов естественного гормона и стресса. LOX обычно представляют собой растительные белки кодирующиеся в геномах растений. Так высокий уровень липоксигеназы приводит к росту тканей. Имеются данные, что липоксигеназа играет активную роль для процесса предотвращения процесса старения растений, а также, влияет на продолжительность хранения продуктов без изменения их органолептических свойств[14].
Другим наиболее важным ферментом в семенах масличных культур, в том числе и сои, различают нерастворимую и растворимую формы липазы. Липазы (КФ 3.1.1.3) - ферменты, катализирующие гидролитическое расщепление триглицеридов (нейтральных жиров) на составляющие их жирные кислоты и глицерин, которые используются организмом в качестве энергетического и пластического материала (рис. 2).
Рисунок 2. Гидролитическое расщепление триацилглицерола под действием липазы [35].
По мнению ряда авторов, [36,37], активный центр липаз можно разделить на три области с функциональными вариациями: первая - контактная, отвечающая за идентификацию поверхности фазы субстрата; второй - это сайт гидрофобного связывания, который притягивает молекулу субстрата из субстратной фазы к глобуле фермента; третья - образованные группы, инициирующие каталитический акт гидролиза сложноэфирной связи [36].
Для семян сои характерна нерастворимая форма липазы, наибольшая активность которой наблюдается при рН=5, а прорастающие семена имеют рН близкий к 7,0 и [15]. Липазы сои имеют два пика активности: при 35 оС и при 65 оС. Одним из наиболее благоприятных условий для проявления липазной активности является температура от 35 до 40 °С. Инактивация фермента наступает при температуре более 70 оС.
В последнее время значительную долю рынка промышленных ферментов (почти 70%) составляют гидролазы, в том числе липазы. Использование ферментных препаратов липазы разной степени очистки позволяет не только улучшить показатель и урожайность в различных биотехнологических процессах, но и даёт возможность улучшить производство кормов, повысить способность поедания кормов, сделать синтетические моющие средства более целенаправленными и эффективными, улучшить качество косметических препаратов и создать целый арсенал специфических, чувствительных и точных аналитических методов для продвижения производства лекарств и профилактических средств для медицинской промышленности и т.д. [15].
В семенах сои содержится большое количество β-амилазы (α-1,4-глюкан-мальтогидролаза, К.Ф.3.2.1.2) — фермента экзо-типа, катализирующего последовательное отщепление мальтозы нередуцирующего конца молекул амилозы, амилопектина, амилодекстринов (рис.3).
Рисунок 3. Расщепление крахмала на мальтозу под действием β-амилазы [16].
Фермент расщепляет в крахмале только α-1,4-гликозидные связи, а сырой крахмал не гидролизует. Амилоза гидролизуется полностью. Минимальный расщепляемый фрагмент – Г4. От ветвей амилопектина отщепляется по 10–12 мальтозных остатков. Гидролиз амилопектина может идти до предпоследней связи, граничащей с точкой ветвления. Нерасщепленные фрагменты амилопектина носят название β-предельных декстринов. В результате гидролиза крахмала β-амилазой образуется 54–58 % мальтозы и 42-46 % предельных декстринов. Мальтоза при отщеплении переходит в β-форму, что объясняет название фермента.
В зерне β-амилаза присутствует в активной и латентной форме. При прорастании латентная форма активируется под действием протеаз, осуществляющих процессинг фермента. Зерновые β-амилазы наиболее активны при рН 4-6, стабильны при рН 4-8. Оптимальная температура действия фермента 40-50°С, температура стабильности – не выше 60°С. Зерновые β-амилазы – сульфгидрильные ферменты, их активность подавляют тяжёлые металлы и окислительные агенты [17,18].
Пероксидаза (КФ 1.11.1.1 — 1.11.1.10) – железопорфириновый фермент, относящийся к классу оксидоредуктаз, который повсеместно встречается во всех растениях, животных и микроорганизмах[6].
Фермент катализирует окислительно-восстановительную реакцию в присутствии пероксида водорода, который выступает в качестве акцептора электронов, многих видов органических субстратов посредством высвобождения кислорода [38]. Фермент присутствует в хрене, соевых бобах, томатах, картофеле, репе, моркови, пшенице, бананах, клубнике. Пероксидаза имеет широкое практическое применение, в частности, в медицине в качестве компонента диагностических систем для биохимических и иммуноферментных анализов. В иммуноферментных методах пероксидаза широко используется для приготовления антитело-фермент или антиген-антитело-фермент коньюгатов, в виду высокого сродства, высокой скорости протекания реакции и большей чувствительности [39].
Пероксидаза сои представляет интерес благодаря некоторым уникальным характеристикам: высокая термостабильность (температура инактивации выше 80°C), высокая реакционная способность и стабильность при низких значениях рН (от рН 2 до рН 11) и в ряде органических растворителей. Пероксидаза сои содержится в большом количестве в семенной оболочке сои, являющейся дешёвым сырьём и побочным продуктом при переработке сои. Полный спектр биологических функций перокисдазы до сих пор остаётся неясным, несмотря на то, что основной функцией является разложение перекиси водорода на воду и кислород [6].
Сукцинатдегидрогеназа (СДГ, КФ 1.3.99.1) представляет собой мультифункциональный фермент и по этой причине имеет практически универсальное распространение среди живых организмов. На шестой стадии цикла Кребса СДГ катализирует реакцию окисления сукцината до фумарата с восстановлением убихинона до убихинола (рис.4).
Рисунок 4. Окисление сукцината до фумарата под действием СДГ [19].
СДГ содержит ковалентно связанный кофактор ФАД. Впервые очищенный препарат растворимой СДГ из животных тканей был получен Сингером в 1954 г. Митохондриальная СДГ состоит из четырех структурно различных субъединиц: двух гидрофильных и двух гидрофобных. Первые две субъединицы, флавопротеин (SdhA) и железосернистый белок (SdhB), образуют гидрофильную головку, в которой происходит ферментативная активность комплекса. SdhA содержит ковалентно присоединенный кофактор флавинадениндинуклеотида (FAD) и сайт связывания сукцината а SdhB содержит три железосернистых кластера: [2Fe-2S], [4Fe-4S] и [3Fe-4S]. Вторые две субъединицы-это гидрофобные мембранные якорные субъединицы, SdhC и SdhD. Митохондрии человека содержат две различные изоформы SdhA (субъединицы Fp типа I и типа II) [9,20].
Сукцинат является наиболее эффективным источником энергии, поэтому анализ активности СДГ может быть важным методом измерения жизнеспособности растений. СДГ сои имеет чётко выраженный оптимум действия между pH 7,0 и 8,0. Оптимальная температура действия фермента 25°С, температура стабильности – не выше 45°С [11].
СДГ является ключевым ферментом в промежуточном метаболизме и производстве аэробной энергии в живых клетках. Эти ферменты катализируют окисление сукцината в фумарат в цикле Кребса, производные электроны подаются в комплекс дыхательной цепи III для восстановления кислорода и образования воды. Это создает электрохимический градиент на внутренней мембране митохондрий, позволяющий синтезировать АТФ. В качестве альтернативы электроны могут быть перенаправлены для уменьшения убихинона и обеспечить восстановительные эквиваленты, необходимые для уменьшения супероксидных анионов, происходящих либо из экзогенного источника, либо из самой дыхательной цепи [8].
В реакции окисления сукцината до фумарата два атома водорода удаляются из субстрата флавинадениндинуклеотидом (ФАД), протетической группой, которая плотно прикреплена к СДГ, ФАД является его важным кофактором. Образование аденозинтрифосфата (АТФ) в митохондриях связано с окислением никотинамидадениндинуклеотида (НАД) и ФАДH2 и восстановлением кислорода до воды в дыхательной цепи и трехмерной структурой митохондриального белкового комплекса дыхательной мембраны II. Прикрепление ФАД стимулируется, но не зависит от присутствия субъединицы железо-сера и промежуточных продуктов цикла лимонной кислоты, таких как сукцинат, малат или фумарат [9]. Субстратный аналог малоната является конкурентным ингибитором сукцинатдегидрогеназного комплекса. Малонат, как и сукцинат, представляет собой дикарбоксилат, который связывается с катионными аминокислотными остатками в активном участке сукцинатдегидрогеназного комплекса [10].
Уреаза (систематическое название: уреоамидогидролаза, шифр КФ 3.5.3.1) – фермент, относящийся к классу гидролаз, и катализирующий реакцию гидролиза мочевины (рис. 5):
Рисунок 5. Гидролиз мочевины уреазой до CO2 NH3.
В результате данной энзиматической реакции водорастворимый нелетучий органический субстрат – мочевина трансформируется в такие летучие продукты как аммиак и диоксид углерода [7].
Уреаза широко распространена в мире микроорганизмов и ряда растений, особенно в семенах сои. Уреаза чувствительна к поллютантам окружающей среды. Среди всего разнообразия загрязняющих веществ ТМ, особенно свинец, обладают способностью аккумулироваться в почвенном покрове и оказывать длительное влияние на скорость и направление биохимических реакций, протекающих в почвенной среде, что также оказывает токсическое воздействие на живые организмы, обитающие в ней в том числе и на семена сои (Фокина, 2008). Ингибирующий эффект начинает проявляться при концентрации 2,5×10-6 моль/л и достигается 100% при концентрации 5×10-3 моль/л. Присутствие этих ионов в реакционной среде в концентрациях, превышающих концентрацию 5×10-3 моль/л приводит к денатурации фермента и полой потере его каталитической активности. Чувствительность уреазы к различным условиям среды свидетельствует о высоком адаптивном потенциале. С другой стороны, уреаза является косвенным показателем оценки содержания антипитательных веществ. Снижение количества, которых приводит к улучшению качественных характеристик сырья, благоприятному усвоению питательных веществ животными, и человеком. Эти данные согласуются с результатами, полученными во многих исследованиях [27-34].
Растительная уреаза является гомоолигомерным белком, состоящим из одноцепочечного полипептида обозначенная как α, включающего 840 аминокислот на молекулу, из которых 90 являются остатками цистеина [26]. Молекулярная масса фермента в зависимости от сорта может колебаться от 480 до 545 кДа для уреазы бобов (расчётная масса по аминокислотной последовательности) [21].
Архитектура активного участка растительной уреазы аналогична архитектуре бактериальных уреаз, содержащих би-никелевый центр с ионами никеля Ni1 и Ni2, разделёнными расстоянием 3,7 ангстрема. Растительная уреаза в своем активном центре имеет связанный фосфат и ковалентно модифицированный остаток (Cys592) бета-меркаптоэтанолом, а сопутствующее связывание нескольких ингибиторов (фосфата и бета-меркаптоэтанола) до сих пор не наблюдается в бактериальных уреазах. Пара Ni (II) имеет слабую антиферромагнитную связь.
На активность фермента влияют несколько факторов, один из которых - температура. При увеличении температуры скорость гидролиза мочевины уреазой возрастает прямо пропорционально в интервале температур 25-60° С. Инкубация при более высокой температуре ведёт к снижению скорости гидролиза из-за инактивации фермента. Активность уреазы достигает оптимального состояния при 35° C [22,23].
Уреаза обладает каталитической действием в широком интервале значений pH с максимумом активности в зоне нейтральных pH. В кислой и щелочной среде конфирмация фермента меняется, что приводит к резкому снижению активности фермента. Оптимальным значением активности уреазы бобов сои считается рН 7,4 [24]. Скорость биохимических процессов так же существенно зависит от природы субстрата и реакционной способности фермента, которая, в свою очередь, зависит от специфичности фермента к субстрату. Например, активность уреазы может меняться в зависимости от сорта, или частей одних и тех же семян. По мнению Simanjuntak, M. 2003, что активность фермента увеличивается с уменьшением размера соевых зёрен, т.е. с увеличением их относительной поверхности, а также при механическом воздействии на структуру бобов (например, при длительном помоле зерна) [25].
Скорость биохимических процессов так же зависит от концентраций фермента и реагирующих веществ. При избытке субстрата скорость реакции, как правило, определяется концентрацией фермента т.е чем она выше, тем быстрее идут реакции (Самнер, 1948) [25].
Несмотря на то, что данный фермент был обнаружен и очищен еще в 1926 году (именно из растительного источника), его функция у растений до сих пор остаётся не оконца изученной, выдвигаются предположения о том, что уреаза выполняет защитную функцию.
Обобщённые данные о биологической роли и биотехнологическом потенциале ферментов семян сои представлен в таблице 1.
Таблица 1. Биологическая роль и биотехнологический потенциал ферментов сои.
|
Название фермента, pH оптимум, t оптимум |
Биологическая роль |
Использование в биотехнологических целях |
|
Липоксигеназа (КФ 1.13.11.12)
pHопт = 5,8 ед. (LOX -1) 6,2 ед. (LOX -2) tопт = 35-40°С (LOX -1) 35-55°С (LOX -2) |
Диоксигенация полиненасыщенных жирных кислот в гидропероксиды |
Пищевая промышленность; Парфюмерная промышленность; Активность LOX рассматривается в качестве биологического маркера физиологического состояния растения;
|
|
Липаза (КФ 3.1.1.3) pHопт = 5,0 ед. tопт =35-65 °С |
Гидролитическое расщепление триглицеридов на жирные кислоты и глицерин |
Косметологическое производство; Кормопроизводство; Химическое производство; Повышение чувствительности и точности аналитических методов. |
|
β-Амилаза (α-1,4-глюкан-мальтогидролаза, КФ.3.2.1.2) pHопт = 4,0 – 6,0 ед. tопт =45-50°С |
Отщепление мальтозы |
Пищевая промышленность; При изготовлении солода; Хлебопечение; Виноделие; Крахмалопаточная промышленность; Текстильная промышленность; Бумажная промышленность; Химическая промышленность. |
|
Пероксидаза (КФ 1.11.1.1 — 1.11.1.10) pHопт =2,0-11,0 ед. tопт =До 80°С |
Разложение перекиси водорода на воду и кислород. |
Использование в иммуноферментном анализе; При разработке электронных биосенсоров; Биотрансформациях; Пероксидазы эффективно используют для биоотбеливания в целлюлознобумажной промышленности; При изготовлении натуральных ароматизаторов; Использование в качестве маркеров химического загрязнения природных сред. |
|
Сукцинатдегидрогеназа (СДГ, КФ 1.3.99.1) pHопт = 7,0 -8,0 ед. tопт = до 45°С |
Окисление сукцината до фумарата |
Может быть использована для регенерации ФАД или ФАДН при исследовании других ферментных систем, в аналитических измерениях сукцината в биологических образцах, в иммуноферментном анализе многих антигенов в качестве фермента-маркера митохондрий, в пищевой промышленности для исследования качества продуктов |
|
Уреаза (уреоамидогидролаза, КФ 3.5.3.1) pHопт = 7,4 ед. tопт = 25-60°С |
Гидролиз мочевины с выделением аммиака и углекислого газа;
|
Может быть использована для освобождения различных жидкостей от мочевины трудноудаляемого вследствие хорошей растворимости продукта азотного обмена живых организмов; Активность уреазы может быть рассмотрена в качестве биологического маркера качества и безопасности растений; |
Учитывая огромные перспективы применения ферментов в различных отраслях промышленности и сельского хозяйства, медицине, можно сделать заключение о необходимости расширения исследований в этой области.
Заключение. К настоящему времени накоплено достаточное количество информации как о строении, биологической роли, кинетике большинства ферментов сои, так и биологической роли, как для растений, так и применении в биотехнологии. Ферментная система, включающая липоксигеназу и пероксидазу, может служить индикатором устойчивости сорта. Роль липоксигеназы и пероксидазы в системе иммунной защиты растений, антипатогенном действии против вирусов и бактерий, стресса и различных загрязнителей окружающей среды хорошо известна. Ферменты комплекса бета – амилазы, липазы, сукцинатдегирогеназы, уреазы являются наиболее важными ферментами основных метаболических путей живых систем. Перспективным маркёром качества и безопасности сои может выступить уреаза.
ЛИТЕРАТУРА
1.Хочачка П.В. Стратегия биохимической адаптации / П. Хочачка, Дж. Сомеро; пер. с англ. Ю.И. Лашкевича; под ред. и с предисл. акад. Е.М. Крепса. Москва: Мир, 1977. 398 с.
2.Лукьянова О.Н. Молекулярные биомаркеры: оценка состояния морских беспозвоночных при хроническом загрязнении среды. Владивосток: ДВГАЭУ, 2001. 192 с.
3.Ковалев Н.Н. Холинэстераза биохимические механизмы адаптации гидробионтов: дис. … д-ра биол. наук.. Владивосток, 2003. 280 с.
4.Цветков И.JI. Биохимические параметры стресс-редуцирующей реакции гидробионтов при интоксикации: автореф. дис. … д-ра биол. наук. Москва, 2009. 46 с.
5.Hochachka P.M., Somero G.N. Biochemical Adaptation. Oxford: Princeton University Press, 2002. 480 p.
6.Андреева В.А. Фермент пероксидаза: участие в защитном механизме растений / отв. ред. Ю.Н. Журавлев; АН СССР. Москва: Наука, 1988. 127 с.
7.Мецлер, Д.Э. Биохимия: химическая реакции в живой клетке / пер. с англ. под ред. А.Е. Браунштейна [и др.]. Москва: Мир, 1980. 488 с.
8.Rustin P., Munnich A., Rötig A. Succinate dehydrogenase and human diseases: new insights into a well-known enzyme // Eur. J. Human. Gen. 2002. № 10. Р. 289-291.
9.Robinson K.M., Lemire B.D. Covalent attachment of FAD to the yeast succinate dehydrogenase flavoprotein requires import into mitochondria, presequence removal, and folding // Biol.. Chem. 1996. № 271. Р. 4055-4060.
10.Hajjawi O.S. Succinate dehydrogenase: assembly, regulation and role in human disease // Eur. J. Sci. Res. 2011. № 51. Р. 133-142.
11.An abscisic acid-independent oxylipin pathway controls stomatal closure and immune defense in Arabidopsis / J.L. Montillet, N. Leonhardt, S. Mondy [et al.] // PLoS Biol. 2013. 11 p.
12.Antagonistic role of 9-lipoxygenase-derived oxylipins and ethylene in the control of oxidative stress, lipid peroxidation and plant defence / M.A. López, J. Vicente, S. Kulasekaran [et al.] // Plant J. 2011. 67 p.
13.Шлеленко Л.А. Разработка комплексных улучшителей для интенсивной технологии хлебобулочных изделий из пшеничной муки: дис. ... канд. техн. наук. Москва, 2001. 209 с.
14.Кретович В.Л. Биохимия растений: учебник. Москва: Высш. шк., 1986. 503 с.
15.Демченко Ю.А. Липаза: свойства, источники, способы получения, применение // Наука: комплексные проблемы. 2018. № 2 (12). С. 16-35.
16.Biotechnological potential of agro-industrial residues. II: cassava bagasse / A. Pandey, C. R. Soccol, P. Nigam[et al.] //Bioresource Technol. 2000. № 74 (1). Р. 81-87.
17.Козьмина Н. П. Биохимия зерна и продуктов его переработки / Н.П. Козьмина. Москва: Колос, 1976. 375 с.
18.Бондаренко Л.С. Изоферменты альфа-амилазы и их генетический контроль у мягкой пшеницы: автореф. дис. ... канд. биол. наук. Москва, 2017. 21 с.
19.Crystal structure of mitochondrial respiratory membrane protein complex II. / F. Sun, X. Huo, Y. Zhai [et al.]. 2005. URL: www.semanticscholar.org/paper/Crystal-Structure-of-Mitochondrial-Respiratory-II-Sun-Huo/ae0238d12c2dedbd48324da09c438159f3471c1d/ DOI:10.1016/j.cell.2005.05.025
20.Singer T.P., Kearney E.B., Kenney W.C. Succinate Dehydrogenase // Advances in Enzymology and Related Areas of Molecular Biology / ed. A. Meister. New York: John Wiley & Sons Inc., 1973. Vol. 37.
21.Краевская Б. Уреазы I. Функциональные, каталитические и кинетические свойства: обзор // Журнал молекулярного катализа B: Ферментативный. 2009. № 59 (1-3). С. 9-21.
22.Purification and characterization of collagenase from Bacillus licheniformis F11. 4 / A. Baehaki, M.T. Suhartono, D. Syah [et al.] // African Journal of Microbiology Research. 2012. Vol. 6, № 10. P. 2373-2379.
23.Saropah D.A. Kinetika reaksi enzimatis ekstrak kasar enzim selulase bakteri selulolitik hasil isolasi dari bekatul // Alchemy. 2013.
24.Pervin S., Chaudhuri G., Singh R. NO to breast: when, why and why not? // Curr Pharm. Des. 2010. № 16. Р. 451-462.
25.Большая медицинская энциклопедия: в 30 т. / гл. ред. Б.В. Петровский. 3-е изд. Москва: Сов. энциклопедия, 1974-1989.
26.Krajewska B., Wydro P., Jańczyk A. Probing the modes of antibacterial activity of chitosan. Effects of pH and molecular weight on chitosan interactions with membrane lipids in Langmuir films // Biomacromolecules. 2011. № 12.
27.Рассолов С.Н. Влияние препаратов селена и йода в комплексе с пробиотиком н баланс азота, кальция и фосфора в рационе молодняка свиней // Достижения науки и техники АПК. 2012. № 1. С. 23-24.
28.Ратошный А.Н., Подворок Н.И. Методы снижения ингибирующего действия нативной сои в рационах свиней и крупного рогатого скота. Краснодар: СКНИИЖ, 2005. 41 с.
29.Кириенко М.П. Соя – основа кормов высокопродуктивных коров // Достижение науки и техники АПК. 1993. № 4. С. 25-28.
30.Анищенко Н.И. Перспектив использования соевого белка в пищевых целях. Благовещенск, 1998. С. 75-79.
31.Бородин Е.А. Продукты из сои и здоровье человека. Благовещенск, 1998. С. 19-28.
32.Доронина Ю.А. Целебная соя. Санукт-Петербург: Невский проспект, 2002. 160 с.
33.Свободова В. Пища, полная здоровья. Ростов-на-Дону, 1998. С. 37.
34.Щербакова Е.В. Применение биотехнологических методов при пеработке растительного масличного сырья: монография. Краснодар: Ризограф, 2006. 288 с.
35.Rottici D. Candida antarctica Lipase B A Tool for the Preparation of Optically Active Alcohols // Enzymes in Nonaqueous Solvents. Methods in Biotechnology / E.N. Vulfson, P.J. Halling, H.L. Holland (eds). Humana Press, 2001. Vol. 15.
36.Иммобилизация и стабилизация ферментных препаратов липаз / В.С. Гамаюрова, М.Е. Зиновьева, Е.В. Елизарова, К.Л. Васина // Вестник Казанского технологического университета. 2007. № 2. С. 103-108.
37.Мартемьянова Л.Е., Антипова Л.В. Применение ферментных препаратов в получении растительных белков // Вестник Воронежского государственного университета инженерных технологий. 2013. № 1 (55). С. 104-108.
38.Рогожин В.В. Пероксидаза как компонент антиоксидантной системы живых организмов. Санкт-Петербург: ГИОРД, 2004. 240 с.
39.Brill A.S. Peroxidases and catalase // Comprehensive Biochemistry / M. Florkin, E. H. Stotz (eds.). 1966. Р. 447-479.
40.Zhang R., Wong K. High performance enzyme kinetics of turnover, activation and inhibition for translational drug discovery // Expert Opin Drug Discov. 2017. Р. 17-37.
_____________________________________________________________________________
Крайнюкова Елена Юрьевна, лаборант кафедры химии АГУ, магистрант 2 курса факультета естествознания АГУ e-mail: Этот адрес электронной почты защищен от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.
Kraynyukova Elena Yuryevna, laboratory assistant at the Department of Chemistry, ASU, student 2 courses of faculty of natural Sciences of Adyghe State University e-mail: Этот адрес электронной почты защищен от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.
Цикуниб Аминет Джахфаровна, доктор биологических наук, профессор, директор НИИ комплексных проблем АГУ, зав. лабораторией, тел. 8928461725, e-mail: Этот адрес электронной почты защищен от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.
Tsikunib A.D., Head of Nutrition and Environment Laboratory, Director of Scientific Research Institute of complex Problems of Adyghe State University тел. 8928461725, e-mail: Этот адрес электронной почты защищен от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.